实时定量pcr原理，实时定量PCR是定性和定量分析技术的组合，用于检测和定量特定的DNA序列。它结合基因扩增技术，通过检测基因扩增过程中的反应热启动末端，来测量RNA和DNA的变化。

1. 实时定量PCR（Real-Time Quantitative PCR，简称Q-PCR）是一种利用荧光实现的对核酸序列定性和定量分析的技术，它是基因芯片、传统定量PCR和杂交技术的综合。

2. Q-PCR的测定核酸产物的过程中使用了特殊的探针或引物，这些探针或引物都含有发射和吸收荧光物质。

当扩增物被逐渐形成时，探针或引物会结合特定核酸，然后荧光物质开始发射荧光。

3. Q-PCR技术测定目标基因的变化有效地抑制了杂交的影响，同时可反映特定序列的相对含量，可用来评估转化样本的含量以及转录活性。

4. Q-PCR的实际操作分为三个步骤：

样品预处理、反应体系配制和扩增检测。

预处理主要是对样品进行核酸萃取和纯化。

反应体系配制是将荧光标记的引物，信号素，模板核酸和聚合酶等添加到反应管中。

扩增检测是每个循环完成后，在特定温度下启动荧光发射，多次循环完成后能获取并测定反应管中的目标物质。

5. Q-PCR技术的准确性和灵敏度极高，检测时间很短，能实时监测目标基因的增长情况，大大减少了样品前处理时间。

它能有效排除杂交和重复性错误，使定量PCR变得更加准确和精准。

实时定量荧光PCR

1.实时定量荧光PCR是一种利用荧光标记物指示PCR产物或显色剂监测PCR反应的发育方法，其特点在于反应过程及其产物可以实时地被检测和定量。

2.实时定量荧光PCR的分为四大步骤--模板准备、PCR反应、图谱以及数据分析。

其中模板准备中包括模板制备和模板质检两个步骤，PCR反应过程主要是实现反应循环和定量，图谱步骤是了解反应产物的特征，数据分析是对图谱做出的解释以及结论的得出。

3.实时定量荧光PCR的优势主要在于可以快速准确的检测出特定基因目标的表达量，可以根据结果得出基因表达水平的变化，而这在基因表达研究领域具有重大意义。

4.实时定量荧光PCR的应用也很广泛，包括变异的筛查、基因组全谱研究、转录组分析、菌群多样性测定、抗药性检测等。

荧光定量pcr结果分析

1.荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)是基因分析（Gene Analysis）中一种定性和定量测定方法。

它可以用来检测特定基因在样本中的表达水平，是一种快速、灵敏、可重复性强的分子技术。

2.荧光定量PCR是一种反应机理，可以检测特定标记的反转录PCR，也可以检测特定物质的含量。

通过使用不同的反转录和测序酶，研究者可以从特定物质中检测数量跃升、下降等变化状态。

3.荧光定量PCR结果分析一般分三步来进行：

第一，采用反转录PCR技术，提取样本内假信用酶特定DNA片段。

第二，将提取的特定DNA片段反转录成cDNA，并以特定探针标记后进行定量。

第三，将测定结果用曲线和ABS值拟合，计算出特定cDNA的量值，得到结果。

4.荧光定量PCR结果分析中，如果测试的结果得出的拟合曲线不是很理想，可以考虑改变检测温度、重复检测或者重新设计探针。

而如果拟合曲线效果较佳，则可以对样本内目标基因的表达水平进行正确的定量分析，从而得出有价值的信息。